Hobby i zainteresowania
uzyskać płytę dla komórek . Płytkę przemywa się dwukrotnie 10 ml PBS ( solanka buforowana fosforanem) bez wapnia i magnezu. Dodać 2 ml Detacher ( trypsyny ) . Inkubować płytki przez trzy minuty w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Obserwować płytkę pod mikroskopem, aby upewnić się, że komórki zostały oderwane . Delikatnie przenieść płytę do odłączenia wszystkich komórek z dna płytki. Dodaj 10 ml ( człowieka keratinocyctes HEK naskórkowe ) i FCS średnim ( płodowej surowicy krów ) . Użyj pipety 10 - mililitr przenieść komórki w górę iw dół .
2
Przestrzegać komórki pod mikroskopem , aby zapewnić , że są pojedyncze komórki . Pipety pomocą pipety 10 - mililitr aż komórki są pojedyncze, w razie potrzeby. Wirować komórki przez dwie minuty przy 1000 obrotach na minutę. Odrzucić supernatant . Umieszczenie komórek w 10 ml płodowej surowicy cielęcej . Odwirować komórki ponownie przez dwie minuty przy 1000 obrotach na minutę. Odrzucić supernatant . Umieszczenie komórek w 200 mikrolitrach zewnętrznej roztworu zapisu. Obserwować komórki pod mikroskopem pojedynczych komórek z gładkiej membrany.
3
Umieścić roztwór soli wewnątrz układu patch clamp . Dodać kroplę wewnątrzkomórkowego roztworu elektrolitu do dolnej części wióra przy użyciu pipety . Zamontować procesor na czapce krętego . Zakrętką zawiera elektrodę odniesienia oraz linię ssącą . Dodać kroplę zewnątrzkomórkowej roztworu elektrolitu do góry za pomocą pipety układzie . Roztwór elektrolitu pozwala na chipie stykają się z elektrodą. Dodanie 5 mikrolitrów zawiesiny komórek w roztworze soli fizjologicznej w układzie scalonym. Umieść jedną komórkę za pomocą ssania przez pipety . Ssanie może być wykonywane ręcznie poprzez zasysanie powietrza poprzez pipety. Pozycjonowania zwiększa odporność komórek w celu utworzenia uszczelnienia . Uszczelnienie umożliwia dochodzenia całej komórki. Imperium