Jak Kalibracja kolumny żelowa

kolumny do filtracji żelowej są stosowane do oddzielenia białka od złożonych mieszanin . Ponieważ każde białko ma unikalny ciężar cząsteczkowy , może być indukowane do rozdzielenia na poszczególne warstwy , migrując je przez kolumnę do chromatografii zawierającą równomiernie matrycy żelowej . Aby poprawnie zidentyfikować każde białko , które oddziela się , musisz skalibrować kolumn przy użyciu kilku białek znanych weight.Things molekularnych trzeba Obrazów anhydrazy węglowej Obrazów cytochromu C Obrazów Aprotynina Obrazów Basal sól
probówki
ferrytyny Obrazów Wirówka
pipetą pompą
cylindra miarowego o pojemności 250 ml płyn buforowy

Naukowy chusteczki Foto czyszczenia cylindra strzykawki
Pokaż więcej instrukcji

1

Wyjąć fiolki anhydrazy węglanowej , cytochromu C i aprotyniną z lodówki lub zamrażarki i pozwolić im osiągnąć temperaturę pokojową . Dodaje się 4 mg białka w każdej probówce do wirowania na ml żelu na kolumnie filtracyjnej . Dodać 961 mcl dobową soli na miligram białka do każdej probówki do wirowania , w celu rozpuszczenia białek. Dodaj 39,2 MCL ferrytyny na mililitr żelu do każdej probówki , a następnie wymieszać w wirówce .
2

wyłączyć pompę kolumnie filtracyjnej i zamknąć zawór odcinający na wejściu kolumny. Odkręcić , ale nie wyjmuj , na szczyt kolumny filtracyjnej . Ustawić pompę do maksymalnego natężenia przepływu dla kolumny i ponownie uruchomić pompę , aż materiał został przygotowany bufor wyłączyć . Zatrzymać pompę .
3

Dodać 1 ml każdego białka do kolumny za pomocą pompy filtracji pipet . Ściekać białka dół wewnątrz kolumny z wysokości 1 cm do 2 cm, do pracy przy wewnętrznej krawędzi kolumny. Pozostawić mieszaninę białek na osiedlenie się na górze matrycy żelowej .
4

Umieścić rurkę wylotową pompy w czystej, suchej 250 ml cylindra miarowego. Ponownego uruchomienia pompy z szybkością 0,30 ml na minutę, a prowadzony białek w matrycy żelowej. Podczaspracy pompy , opłukać ścianki rury za pomocą pompy z pipet oraz niewielką ilość cieczy buforowej. Gdy białka są w pełni wprowadzone do osnowy żelowej , zmniejszenie prędkości pompy, do 0,02 ml na minutę i pompę w 5 cm do 7 cm warstwą cieczy buforowej na wierzchu osnowy.
5

odłączyć czapka z kurkiem kolumna . Oczyścić korek kolumny i wnętrze kolumny stosując naukowe ściereczek czyszczących . Ponownie zainstalować nakładkę kolumny. Napełnić zbiornik buforowy w cieczy buforowej. Dołączyć cylinder strzykawki z zaworem odcinającym i otwórz go . Za pomocą strzykawki do sporządzania niewielkiej ilości buforu przez rurkę i do strzykawki. Zamknąć zawór i ponownie podłączyć go do kolumny górnej . Otworzyć zawór odcinający i sprawdzić szczelność .
6

Uruchom kolumnę w 0,02 ml na minutę przez kilka dni , ażzespół ferrytyny zbliża się koniec kolumny . Zbierz wszystkie żel filtracji , która jest pompowana w cylindrze . Imperium