Jak Rozwiązywanie Primer dimeru

reakcji łańcuchowej polimerazy lub PCR jesttechniką , w biologii molekularnej stosuje się do zamplifikowania określonych fragmentów DNA . PCR jest zależna od starterów , które są krótkie nici DNA, które są komplementarne i specyficzne dla DNA będącego przedmiotem zainteresowania. Chociaż startery ogół wiążą się z sekwencji DNA dopasowania ich , że od czasu do czasu będzie wiązać się i wzmacniają nawzajem , powodując zjawisko znane jako podkład dimer.Things musisz Zbiory Sekwencje starterów

Pokaż więcej instrukcji
1

Zbadaj zawartość GC ( ilość patyków i C jest ) w swojej sekwencji startera . GC klejenie jest silniejsze , niż w wiązaniu ze względu na dodatkowe wiązanie wodorowe pomiędzy guaniny i cytozyny . Optymalne klejenie wynosi co najmniej 50 procent zawartości GC .
2

Sprawdź temperaturę wyżarzania swojej reakcji . Niskie temperatury wygrzewania , ogólnie zdefiniowane jako 55 ° C lub poniżej, powodują niespecyficznego wiązania starterów , które mogą powodować dimerów starterów , oprócz amplifikacji niewłaściwych części genomu .
3

Podwójna -Check ilość i stężenie starterów dodanego do reakcji PCR . Nadmiar starterów , na ogół ponad 75 pikomoli , może powodować dimerów starterów , jak również.