Jak przygotować wiszącą kroplę

W celu określenia struktury 3D białka , należy najpierw czysty kryształ nim . Metoda wykorzystuje wiszące upuść kroplę roztworu zawierającego białko wiszące z szkiełko . Pod tym wiszącej kropli znajduje się zbiornik o wyższym stężeniu soli niż w kroplę . W czasie, pary wodnej opuszcza kropli , a kończy się w zbiorniku , przez cobiałko krystalizacji. Każde białko wymaga innych warunków (takich jak stężenie soli i pH ) , często metodą prób i błędów oferuje jedyny sposób , aby znaleźć odpowiedni conditions.Things będzie potrzebne Foto fartuch , rękawice i ochronę oczu Foto mikropipeta z pipety wskazówki
1 molowy roztwór chlorku sodu w 0,05 molowym buforze octanowym , pH 4,7
2 ml probówek Eppendorf ( lub podobnego) Foto wirówki Obrazów 24 dołkach Obrazów smar
próżnię w strzykawce silikonowane Coverslip Zbiory sprężone powietrze Zbiory Pincety
ceglana (np modeliny lub podobne ) Łódź 50 mg /ml lizozymu w 0,05 molowym roztworze buforu octanu , pH 4,7
Pokaż więcej

1

Nosić sprzęt laboratoryjny ( płaszcz , rękawice i ochrony oczu) .
2

Użyj mikropipety dodać 1,1 ml roztworu chlorku sodu ( soli ) i do roztworu buforowego octanu rura Eppendorf .
3

Wirówkazamknięta rurka Eppendorf z roztworu soli w środku na około pięć minut przy 13000 obr . Należy pamiętać o zrównoważenia wirówki przez umieszczenie innej probówki Eppendorfa zawierającej 1,1 ml wody , a z drugiej przeciwnej do rury roztworu soli.
4

Dodać 1 ml roztworu soli nadołek w24 -dołkowych płyta .
5

Użyj smaru -strzykawkę umieścić cienką warstwę smaru wokół obręczy to dobrze . Uważaj, aby nie dodawać zbyt mało lub zbyt dużo . Jeśli dodać zbyt dużo tłuszczu ,tłuszcz spływa do studni i być może zrujnować eksperyment . Jeśli używasz zbyt mało ,a nie być szczelne i eksperyment się nie uda. Cel na tyle, żetłuszcz i tłuszcz tworzą nakrywkowe hermetyczne uszczelnienie później.
6

Rzuć gliny z rąk do sprawiają, cztery małe kulki , i przesunąć je na czterech rogach24- studzienkową płytkę . Będą one działać jako nośniki dla zapewnienia osłony płyty nie styka się z nakrywkowym .
7

Zastosowanie sprężonego powietrza do blow żadnego pyłu na szkiełko . Trzymając szkiełko z parą czyste pęsetą .
8

podlizywać 4 mikrolitrów roztworu lizozymu z mikropipetą i dodać ten roztwór do centrum szkiełko . Zmień końcówki pipet i dodać 4 mikrolitrów roztworu soli . Delikatnie nanosić górę i w dół , zasysając płyn następnie wypychania go w celu wymieszania roztworu soli z roztworu lizozymu . Uważaj, aby wymieszać dwa bez rozpraszaniapłynu na całym szkiełko .
9

Włącz szkiełko na szybko więcpłyn nie zsunąć i roślin go prosto na szczyciedobrze . Zadbaj , aby delikatnie nacisnąć na nim tak , że tworzy hermetyczne uszczelnienie ze smarem wszystko wokół krawędzidobrze .
10

Przesunąć pokrywę 24 dołkach na kulki gliny , i pozostawić płyta w chłodnym miejscu .