Jak obliczyć Antibody Stężenie

Jedną z najczęściej stosowanych metod obliczania stężenia białek w warunkach laboratoryjnych jest użycie Próby Bradforda . Bradford Odczynnik jestkolorymetryczna odczynnik , który zmienia kolor na podstawie stężenia białka . Poprzez połączenie znanej krzywej standardowej z odczynnikiem Bradford , możesz utworzyć środek przeciwko której można obliczyć zawartość każdego białka , w tym antibodies.Things musisz Foto oczyszczonego przeciwciała w znany bufor Bufor dopasowanie
zawieszenie przeciwciała Foto liofilizowanej albuminy surowicy bydlęcej (BSA) Foto Laboratorium rur Microcentrifge
długopis
Vortex
skali laboratoryjnej
Ważenie papier
1 ml pipety
odczynnik Bradford
Wielu dołkach Obrazów kolorymetryczna czytnik płytek
Microsoft Excel Obrazów książki Lab Foto Pen
Pokaż więcej instrukcji Katowice Tworzenie standardowej
1

Zmierz 200 mg BSA na papier ważenia przy użyciu skali laboratoryjnej . Umieszczenie go w probówki . Dodać 2 ml buforu do probówki zawierającej 200 mg BSA. Etykieta to "1" rury
2

Vortex Tube 1 do BSA całkowicie się rozpuści.
3

Usuń 500 ul z BSA w buforze i transferu że w drugiej rurze . Etykieta ta rura " 2. " Dodaj 500 ul buforu do Tube zwykły 2.
4

Usuń 200 ul BSA w buforze od rury 1 i przenieść do nowej probówki . Etykieta ta rura " 3. " Dodaj 800 ul buforu do Tube zwykły 3.
5

Usuń 100 ul BSA w buforze od rury 1 i przenieść do nowej probówki . Etykieta ta rura " 4. " Dodaj 900 ul buforu do Tube zwykły 4.
6

Usuń 10 ul BSA w buforze od rury 1 i przenieść do nowej probówki . Etykieta ta rura " 5. " Dodaj 990 ul buforu do Tube zwykły 5. Rury 1- 5 zawierają stopniowanie standardową serię . Pierwsza rura ma znanym stężeniu 100 mg /ml; Drugi , 50 mg /ml; trzeci , 20 mg /ml ,po czwarte, 10 mg /ml; orazpiątą , 1 mg /ml . Każda rura zawiera około 1 ml roztworu .
Tworzenie przeciwciał rozcieńczenia
7

Dodaj 5 0UL oczyszczonego przeciwciała do 95 0UL buforu . Etykieta ta rura " A. "
8

Dodaj 10 ul oczyszczonego przeciwciała do 990 ul buforu . Etykieta ta rura " B. "
9

Dodaj 2 ul oczyszczonego przeciwciała do 998 ul buforu . Etykieta ta rura " C "
Foto Włóż płytę
10

Umieścić 0,5 ml zwykłego bufora w pierwszych odwiertów w dwóch kolumnach wielostudzienkowej talerzu.

11

Umieścić 0,5 ml treści Tube 1 w drugim dołków pierwszych dwóch kolumnach w wielostudzienkowej talerzu. Nadal w dół rozcieńczeniach aż dwie pierwsze kolumny zawierają 0,5 ml wzorcowego roztworu BSA jednej z każdej z rurek 1-5 , w tym odwiertów na zwykłym buforze .
12

Dodać 0,5 ml odczynnika Bradforda , aby każdy oraz . Wirować płytkę wymieszać odczynnik z roztworów białkowych , uważając , aby nie wylać zawartość jednego z dołków . Odczekać 5 minut .
13

Czytaj płytę zgodnie z protokołem określonym do czytnika płytek przy długości fali 595 nm .
Oblicz Stężenie przeciwciał

14

Skopiuj wartości odczytane z czytnika płytek do programu Microsoft Excel .
15

Tworzenie wykresu z dwóch kolumn wartości reprezentujących standard BSA za pomocą Kreatora wykresów w programie Microsoft Excel .

16

Działka punkty pomiarowe z rozcieńczeń przeciwciał w wykresie programu Excel. Przeczytaj odpowiednie stężenie białka według wartości osi y dla punktu rozcieńczania przeciwciała na wykresie Excel.
17

W zależności od tego, czy używasz wartości uzyskane od metra A, B lub C , należy pomnożyć wartość przez którąkolwiek 20 , 40 lub 500 , odpowiednio. Uzyskana wartość jeststężenie swojej oczyszczonego przeciwciała .