Metody dla trzeciej hybrydowy drożdżowy system

replikacji chromosomów , przetwarzania mRNA , translację białek , a krytyczne decyzje we wczesnych stadiach rozwoju zależy od wzajemnego oddziaływania DNA , RNA i białek. Oddziaływania te są podstawowe procesy biologiczne ekspresji genów i syntezę białek. Naukowcy często używają Saccharomyces cerevisiae , te same gatunki drożdży używanych w piekarnictwie i parzenia , do badania genów, które kodują specyficznych białek i analizować interakcje między białek i innych cząsteczek . Drożdżowy system trzech hybryd jest jednym z trzech wariantów drożdżowy układ dwu- hybrydowego w celu badania tych oddziaływań. System dwu - hybrydowy

sposób dwa hybrydowe stosuje się do wykrywania oddziaływań białko -białko , patrząc pod kątem ekspresji genu reporterowego . Wiele białek posiada co najmniej dwie domeny , lub oddzielne jednostki strukturalne i funkcjonalne . GAL4 ,białkiem występującym w Saccharomyces cerevisiae , ma domenę wiążącą DNA ( DBD ) i domenę aktywacyjny (AD) . W tej metodzie, jeden białko hybrydowe jest skondensowany DBD idrugiego do AD. Brak genu reporterowego ulega ekspresji fuzji tylko jednego z tych hybryd. Ponieważgen GAL4 reportera jest wyrażona tylko wtedy, gdy obecne są obie hybrydy , wskazane jest interakcji białko - białko .
Trzy hybrydowy system

Metoda identyfikuje trzy hybrydowe gen reporterowy do wykrywania interakcji białka z RNA. Pierwsze białko hybrydowe składa się DBD połączony bezpośrednio z domeną wiążącą RNA. Druga składa się z AD czynnika transkrypcji GAL4 połączonej z białkiem wiążącym RNA. Domeny wiążące RNA interakcji z hybrydowej cząsteczki RNA, które wiążą się dwa białka hybrydowe , tworząc kompleks. Tworzenie kompleksu powoduje ekspresję genu reporterowego, GAL4 . Ponieważgen reporterowy jest włączone tylko przez utworzenie trzech hybrydowego kompleksu , jego obecność wskazuje na oddziaływanie RNA i białka.
Jedną hybrydowego systemu

Sposób jedną hybrydowe stosuje się do wykrywania interakcji białek z DNA . Jeden układ hybrydowy łączy pojedyncze białko , które łączy się bezpośrednio z AD DBD . Zamiast identyfikacji genu reporterowego , metoda ta wygląda dla określonego białka, które muszą rozpoznać docelowej sekwencji DNA . Obecność specyficznego białka wskazuje na oddziaływanie białka z DNA .
One-Two hybrydowy system

jeden-dwa hybrydowe metoda jest stosowana do badania białka - białka i interakcji białko -DNA jednocześnie . Zastosowanie nowo opracowanych szczepów drożdży , w tym sposobie wykorzystuje gen reporterowy GAL4 w celu identyfikacji oddziaływań białko -białko oraz do konsensusu p53 do identyfikacji wzajemnego oddziaływania białko -DNA . Oczekuje się, żemetoda znacznie zwiększyć dokładność wyników doświadczalnych poprzez ograniczenie występowania fałszywych alarmów uzyskanych w innych systemach hybrydowych . Imperium